问题：紧急求助！大虾们，看下吧
类型：求助 (悬赏分:3分)
提问：22725043
等级：▲
版块：有机化学问题(jimuwei,fpcwin1211,netpanda,yjgzfl,Ftian,)
信誉：50%
回复：5
阅读：1180
时间：2006-04-08 15:54:06 编辑加入/取消收藏订制/取消短消息举报该贴

本人这有一瓶淡棕黄色溶液，是用于血红蛋白测定的，提高氰化铁血红蛋白在540nm的吸光度的,我有两种想法：一是这种物质是催化剂，使氰化钾和血红蛋白中的铁离子结合加快，来提高吸度；二是这种物质单独或与氰化铁一起和血红蛋白中的铁形成另一种血红蛋白衍生物，这种衍生物在540nm处有着比氰化高铁更高的吸光度；
这瓶溶液加盐酸会出现黄色沉淀，然后整个溶液变成无色，再加氢氧化钠，沉淀又消失，溶液又变成淡棕黄色；
它里面有钠离子，氯离子，没有钾离子
请求各位大虾帮帮忙忙，指点下，这里面有哪些成份呀？

回复人：沧海一声笑,★★★ (为国家富强奋斗，为人民疾苦呐喊！) 时间：2006-04-08 21:43:16 编辑

1楼

你说的成分可能是:非离子表面活性剂1%(V／V)，磷酸氢二钾.
作用如下:非离子表面活性剂的浓度增加至1%(V／V)，用以消除血浆或上清与氰化高铁血红蛋白试剂混合时出现浑浊现象。同时又在该试剂中增加了磷酸氢二钾，使其缓冲能力增加并中和保存过程中红细胞产生的乳酸，消除了干扰因素。

文献原文如下:
中国输血杂志
CHINESE JOURNAL OF BLOOD TRANSFUSION
2000 Vol.13 No.2 P.102-103
改良氰化法检测血浆血红蛋白在全血
与浓缩红细胞质量控制中的应用

温志刚　何克敏

　　　　关键词　改良氰化法　全血　浓缩红细胞　血浆血红蛋白　质量控制
　　　　中图分类号　R446.11

　　临床上采用邻甲联苯胺法测定血浆游离血红蛋白含量［1］，血浆游离血红蛋白增加是血管内溶血的指征［2］。血站也采用邻甲联苯胺法检测储存全血血浆血红蛋白含量和储存浓缩红细胞上清血红蛋白含量，做为常规质量控制检查全血和浓缩红细胞质量的重要项目。近年来随着抗凝剂的改进、血液保存期的延长，随着成分输血的开展、浓缩红细胞的大量应用，为保证全血与浓缩红细胞的质量，对全血血浆血红蛋白和浓缩红细胞上清血红蛋白的检测也变得更为重要［3］。因此对全血和浓缩红细胞的抽检数量和抽检频率也相应增加，这就需要有一种操作简便、安全可靠、灵敏准确的检测方法。澳大利亚悉尼血站的Raftos J等［4］研究的改良氰化法具有以上的优点。此方法国内文献中尚未见报导。本文目的是把此方法介绍给国内同行，以提高血站质量控制工作水平，保证储存全血及浓缩红细胞的质量。

1　材料与方法

1.1材料　常规质控随机抽取的32袋CP2D-A抗凝剂保存的全血和31袋CP2D-A添加剂保存的浓缩红细胞，于4～6℃保存至35d［3］，将全血和浓缩红细胞样品离心，分别移出血浆和上清，用于两种方法对比实验和改良氰化法稳定性实验。
　　将血红蛋白储存标准液(100g/L)用生理盐水稀释为各种浓度(见2.2)，用于改良氰化法灵敏性实验。
1.2　改良氰化法　改良氰化高铁血红蛋白试剂：0.1mol/L磷酸盐缓冲液，调pH至7.2，再加入0.729mmol/LK3 Fe(CN)6，0.921mmol/L KCN和1%Teric×8或吐温80至1L。避光、4～6℃保存1年［4］。检测方法:2.4ml改良氰化高铁血红蛋白试剂，加入0.6ml的血浆或上清，混匀后置室温20min，用试剂调0点，于分光光度计540nm比色，并按下列公式计算［3］：

　　公式中As=样品吸光度　Ab＝不含Hb血浆(上清)的吸光度；5＝稀释倍数；64458＝国际上公认的Hb平均分子量；44000＝1965年国际血液学标准化委员会(ICSH)公布的Hb摩尔吸光度；1＝比色杯光径
　　取10人份不含血红蛋白的新鲜血浆，按全血的血浆或浓缩红细胞的上清所含抗凝剂或添加液的比例，分别加入抗凝剂或添加液，然后测得10个吸光度值，并求出其平均值即为Ab值。
1.3　邻甲联苯胺法　试剂与测定方法见参考文献［1］。
1.4　本文统计学处理采用差数t检验法。

2　结果

2.1　两种方法的对比测定　用两种测定方法分别检测32袋储存全血血浆血红蛋白含量以及31袋储存浓缩红细胞上清血红蛋白含量。两种方法检测结果差异无显著性(见附表)。

附表　两种方法检测全血血浆及浓缩
红细胞上清Hb(mg/L,±s)

　全血血浆Hb?
(n＝32) 浓缩红细胞上清Hb?
(n＝31)
改良氰化法 717.6±126.3 1340.0±295.1
邻-甲联苯胺 712.0±127.6 1336.5±284.5

　　*t＝1.15，P＞0.05　　**t＝0.60，P＞0.05
2.2　改良氰化法灵敏性实验　血红蛋白标准液分别稀释为2000mg/L、1500mg/L、1000mg/L、500mg/L、400mg/L、200mg/L的已知浓度，由此得出相应的测定浓度为2010mg/L、1495mg/L、1004mg/L、495mg/L、395mg/L、198mg/L，结果能检出的血红蛋白最低浓度为200mg/L。
2.3改良氰化法稳定性实验　将1份血浆或上清标本同时做10管测定作为稳定性实验1；将1份血浆或上清标本同用一批改良氰化高铁血红蛋白试剂每3天测定1次，共测11次，作为稳定性实验2；其结果分别为874.5±11.2，CV(%)＝1.28；876.7±13.8，CV(%)＝1.57，说明此方法有很好的稳定性。

3　讨论

　　Raftos J等［4］研究的改良氰化法，是基于氰化高铁血红蛋白形成的原理，对原氰化高铁血红蛋白试剂配方中各种成分的剂量做了适当调整，特别是在改良氰化高铁血红蛋白试剂中将非离子表面活性剂的浓度增加至1%(V／V)，用以消除血浆或上清与氰化高铁血红蛋白试剂混合时出现浑浊现象。同时又在该试剂中增加了磷酸氢二钾，使其缓冲能力增加并中和保存过程中红细胞产生的乳酸，消除了干扰因素。这一改进使得改良氰化法增加了检测血浆或上清中游离血红蛋白的灵敏度，因而保证了实验结果的准确性。
　　从结果中可看出，改良氰化法与邻甲联苯胺法相比，在检测储存全血血浆血红蛋白和储存浓缩红细胞上清血红蛋白中有相同的灵敏度，其检测游离血红蛋白的范围可从200～2000mg/L，再加上在其稳定性实验中表现出很好的稳定性，改良氰化法可以完全取代邻甲联苯胺法，用于血站对储存期末全血血浆和浓缩红细胞上清中的血红蛋白的检测。
　　改良氰化法较之邻联苯胺法还有许多优点：由于改良氰化高铁血红蛋白试剂性能稳定，在4℃避光保存，至少可保存1年，能大量配制备用，避免了邻联苯胺法实验前的配制多种试剂的准备工作；该法实验步骤少、操作简便易掌握，可将操作误差引起检测结果不准确的因素减少至最小程度。该法取样量较大(0.6ml)，不易出现误差；该法显色反应在室温可稳定数小时，比显色反应不稳定的邻联苯胺法检测结果准确可靠；另外改良氰化法所用的试剂没有邻联苯胺致癌作用。总之，改良氰化法具有操作简便、准确、灵敏、性能稳定、安全可靠等优点，可用于血站对储存全血与浓缩红细胞的常规质控工作中。

温志刚（300110　天津市血液中心）
何克敏（300110　天津市血液中心）

参考文献

1，叶应妩，王毓三，主编.全国临床检验操作规程.第2版，南京：东南大学出版社，1997；186
2，朱忠勇主编.实用医学检验学.北京：人民军医出版社，1992；641
3，Archer G,Parker G.A guide to blood transfusion.5th ed,Sydney:UDOS PTY Limited，1990；339
4，Raftos J,Stewart IM,VALovric.Supernatant hemoglobin determination of the prolonged blood storage.Pathology，1986；18∶123

(2000-01-27收稿，05-20修回)

本文编辑：刘晓明

回复人：沧海一声笑,★★★ (为国家富强奋斗，为人民疾苦呐喊！) 时间：2006-04-08 22:01:02 编辑

2楼

http://61.167.57.95/jp/keedit/pic/2005719223230.doc
血红蛋白的测定?
血红蛋(homoglobin, Hb)的测定常用沙利(Sahli)氏比色法.?
(一) 原理?
表面活性剂溶解红细胞膜,释放血红蛋白.血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白(Hi),在一定得pH值下,Hi与氰离子(CN-)结合生成稳定得棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN).HiCN在波长540nm处有一吸收峰,测定其吸光度,可求得血红蛋白浓度(g/L).
(二) 器材与试剂?
1,分光光度计.?
2,试剂:HiCN转化液?
氰化钾 50mg?
高铁氰化钾 200mg?
无水磷酸二氢钾 114mg?
TritonX—100(或其他非离子表面活性剂) 1.0ml?
蒸馏水 1000ml?
配成后用滤纸过滤,置棕色瓶中,塞紧后保存于冷暗处,但勿使结冰,可保存数月.此液应透明,淡黄色,pH在7.0～7.4之间,以蒸馏水作空白,用540mm比色,吸光度应小于0.001.若变浑,变绿或发生混浊则应废弃.?
(三) 操作方法?
1,取血液20μl加入5ml血红蛋白转化液中,充分混均,静置5min.?
2,用分光光度计比色,波长540mm,光径1cm,以转化液或蒸馏水作为空白,测定吸光度(A).?
(四) 注意事项?
1,可用末梢血液直接测定,静脉血按每毫升血液1.5mgEDTA二钠的比例抗凝,不可用肝素抗凝(可致混浊).?
2,KCN法结果准确可靠,操作简便,但试剂中KCN为剧毒,在配制和保存过程中应提高警惕,防止污染.用于大量标本时,应注意费液处理,可用解毒液除毒,即按每升加次氯酸钠35ml混均后敞开过夜,使CN-氧化成CO2和N2挥发后,再排入下水道.?
(五) 计算?
血红蛋白(g / L)〖WB〗= 测定管吸光度×(64458÷44000)×251= 测定吸光度×367.7
式中:64458是目前国际公认得血红蛋白平均分子量.?
44000是1965年国际血液标准化委员会公布的血红蛋白摩尔吸光度.?
251是稀释倍数.?
(六) 正常参考值?
各种动物血红蛋白正常值在90～120g/L.?

回复人：沧海一声笑,★★★ (为国家富强奋斗，为人民疾苦呐喊！) 时间：2006-04-08 22:03:01 编辑

3楼

[原理] 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化高铁血红蛋白，再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁积压红蛋白。HICN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。特定标准条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1.cm.因此根据标本的吸光度，即可救是血红蛋白浓度。

http://www.511511.com/M5/200404/M500000166120040413054425093.aspx

回复人：22725043,▲ () 时间：2006-04-13 12:47:16 编辑

4楼

谢谢您回答我的问题,但是,我的这瓶试剂是没有含K离子、KCN的；是另一瓶试剂含有KCN，是这瓶试剂测定血液中的血红蛋白，而且形成的氰化铁血红蛋白，而不是氰化高色高铁血红蛋白，是在5分钟以后进行比色的：我说的棕黄色的试剂是加到这个含KCN的试剂里面，在1分钟里面就可以达到5分钟的显色度了。

回复人：22725043,▲ () 时间：2006-04-13 12:47:36 编辑

5楼

得分人：沧海一声笑-1,

问题讨论没有结束...

您尚未进入本论坛,登录之后才可以回贴

7msec