问题：薄层硅胶板
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时间：2007-10-13 08:05:04 编辑加入/取消收藏订制/取消短消息举报该贴

请问一下
进行薄层硅胶板实验时有哪些原则、如何进行、时间应怎么控制？
选择溶剂时应该注意什么问题、有哪些原则？

回复人：672672,★★★★ (我的化工博客：http://672672.blog.sohu.com) 时间：2007-10-13 08:20:09 编辑

1楼

实验八薄层色谱
[实验目的及要求]

学习柱色谱法，纸色谱法，薄层色谱法的原理及其方法。掌握薄层色谱法的操作方法。能进行薄层色谱分离的操作。学习色谱法的原理,掌柱色谱的应用、分离条件,学会柱色谱的使用；学会装柱，上样，洗脱，了解选择洗脱剂的基本思想。

[实验原理]

色谱法是一种物理的分离方法，其分离原理是利用混合物中各个组分的物理化学性质的差别，当选择某一个条件使各个组分流过支持剂或吸附剂时，各组分由于其吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异进行反复的吸附或分配作用而使各组分得到分离。

色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法，分离效果远比分馏、重结晶等一般方法好，在化学、生物学、医学中有着重要的应用价值。

常用的色谱法有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

比移值（Rf） Rf=溶质移动的距离/溶液移动的距离。表示物质移动的相对距离

各种物质的Rf 随要分离化合物的结构，滤纸或薄层板的种类、溶剂、温度等不同而不同，但在上述条件固定的情况下， Rf对每一种化合物来说是一个特定数值。

薄层色谱法（缩写为ＴＬＣ）是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。

⑴吸附剂；

TLC法常用吸附剂有硅胶和氧化铝，其活性见Ｐ71表2-12

一般为含水量越低，活性越高，一般分为五级：

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，含水量为：0%、3%、6%、10%、15%，一级活性最高，五级活性最低。

① 硅胶，常用的有：

硅胶Ｈ——不含粘合剂和其他添加剂。

硅胶G ——含有半水石膏作粘合剂

硅胶ＨＦ254——含荧光物质

硅胶GF254——含有石膏．荧光物质。

② 氧化铝（同硅胶相似）

⑵薄层板的制备和活化（见Ｐ75-76，简单讲解，自学）。

① 制备薄层载玻片；

② 制备浆料；

③ 涂板；１.平铺法；2.倾注法；3. 浸涂法；

④ 薄层板的活化

硅胶板于105-11℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得Ⅲ―Ⅳ 活性的薄层板。

⑶点样

在距薄层板底端8-10mm外，划一条线（用铅笔轻画）作为起点线，用毛细管（内径小于1mm）吸取样品溶液垂直地轻轻接触到薄层的起点线上点样，如果样品较稀可待上一次点样干后，可重复点样2-5次，班点直径为1-2mm圆点为易，多处点样时，点样间距为1-1.5cm。

⑷展开

需在密闭的空器中进行。先将选择好的展开剂放在层析缸中，使层析缸内空气被展开剂饱和，然后将点好样的薄层板放入进行展开，点样的位置必须在展开剂液面之上。当展开剂上升到薄层板的前沿（离顶端5-10mm处）或各组分已明显分开时（不得上升到薄层板顶，否则没有运动上升动力），取出薄层板放平晾平，用铅笔或小针划出前沿的位置。

⑸显色

如果化合物本身有颜色，可直接观察，无色可先在紫外灯下观察有无荧光斑点，还可在溶剂蒸发前用显色剂喷雾显色。常用显色剂见Ｐ76，参2-14

⑹计算Rf值

⑺试样制备

取绿叶类蔬菜5g捣烂，用10ml石油醚（b.p３０－６０℃）萃取2次。萃取液用30 ml饱氯化钠溶液（防止形成乳液），振荡，分出有机层，有机层再用蒸馏水洗2次后分离，每次用30ml。有机层用无水硫酸钠干燥1小时，可用于点样用，石油醚作展开剂。另外，取少量黄连素（三棵针）用乙醇浸提，并适当浓缩后点样，展开剂为7:1:2的正丁醇:乙醇：水（体积比）

柱色谱根据填料的性质不同，分为吸附色谱柱和分配色谱柱。吸附柱色谱常用氧化铝、硅胶。分配色谱柱常用硅胶（有水）、硅藻土、纤维素为载体，吸收大量液体作为固定相。

硅胶柱色谱属于吸附色谱，主要以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到它的表面上，而后用溶剂洗脱展开，利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附作用，和它们在溶剂中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附剂上和溶液之间分布情况的不同而得到分离。极性较大的化合物受到的吸附力大，极性小的化合物受到的吸附力小，在吸附剂和洗脱剂相同时极性小的化合物移动的快，先被洗脱出来。极性大的化合物后被洗脱出来。

分配色谱中的固体仅是做为载体，本身没有吸附能力，对分离不起作用，主要是起到让固定相停留在柱内的作用。被固定的相（液体）叫固定相，洗脱相叫流动相。由于试样中各组分在两相之间的分配比例不同，因此被移动相带着向下移动的速度也不同，易溶于移动相的组分移动的快，而在固定相中溶解度大的组分就移动的慢，因此得到分离。

回复人：afc,★★ (氟化学产品) 时间：2007-10-13 09:23:33 编辑

2楼

1 点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时，应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。在制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变展开剂组成；对样品溶解度过高会使样点发生空心现象；常用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1--2cm 底边距1.5cm；HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm。
2 展开剂的选择
TLC与HPLC相比，一个突出的优点就是流动相的选择具有更大的灵活性。流动相的选择的目的是使绝大部分样品的RF值位于0.1--0.7之间并达到较好的分离，与此对应的是流动相要有适当的强度和组成。流动相强度越大，溶质RF值越大，但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物，根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。一般展开剂体系选择如下：根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调节溶剂比例以寻求适合RF值，适合的RF值找到后，再寻求极性参数相同的二元溶剂体系两个，以这三个组成为三点组成一个三角形，则可看到：三角形顶点是二元体系，边是三元体系，三角形内是四元体系，并且极性一致，可根据几何原理得出任一点组成。这种方法较为直观，也较简单。
3 TLC的通用显色方法
理想的显色希望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得成尤为重要。通用显色法主要有：
（1）、紫外照射法：方便，不破坏样品；
（2）、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用；
（3）、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；
（4）、硫酸溶液：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。

回复人：孤月爎晨,▲▲▲ () 时间：2007-10-13 12:17:36 编辑	3楼
详细透彻,学习了!

回复人：韦恩,★ (一滴水怎样才能永远不会干涸？) 时间：2007-10-13 16:19:53 编辑	4楼
学习

回复人：xuezhizi,▲ (freshman，希望得到帮助。) 时间：2007-10-14 10:39:15 编辑	5楼
要看你是单纯的学生实验，还是用于实验的检测或是分离。前者按照颗本来就好，而后者要看你要检测或是分离的组分，视情况而定。我建议你先找一本有机化学实验书，看一看，然后需要的话，把你要分离的东西的大概类型告诉大家，搭建给你的答案会更有针对性。这样或许对你更有帮助。

回复人：bsxhll,▲ () 时间：2007-10-14 10:47:28 编辑

6楼

呵呵那要看你做的是什么样的试验不同的就需要不同的活性。如果是生产时检测含量或者是检测分离效果的话，我建议你用硅胶G就可以了。再个就是制板说实话那需要经验的积累。铺的不均匀或者太厚或者煮纤维素钠的时候煮的粘度不够，就影响预期的效果。请问你是做什么用的呢？最好从市场上买中性板就挺好的就是贵点。有需要的话我可以帮你制板。

回复人：bsxhll,▲ () 时间：2007-10-14 10:54:55 编辑	7楼
再一点忘记告诉你了就是你说的溶剂选择的问题。那要你你做的是什么样的试验。一般用的展开剂就是三氯甲烷和甲醇显色剂用的是浓硫酸和乙醇配制的也可以用石油醚和乙酸已脂显色剂同上。也可以用碱性板

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