问题：RIPA（强）裂解液
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时间：2022-09-28 16:26:07 编辑加入/取消收藏订制/取消短消息举报该贴

RIPA（强）裂解液
产品简介：
RIPA(强)裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白
样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和
ELISA等。
本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。
RIPA(强)裂解液的主要成分为Tris(pH7.4)，NaCl，1% Triton X-100，1% 脱氧
胆酸钠，0.1% SDS，以及原钒酸钠，氟化钠，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，
可以有效抑制蛋白降解。
用RIPA(强)裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋
白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得
到样品的蛋白浓度。
包装清单：
产品编号产品名称包装
PMK0213 RIPA裂解液(强) 100ml/500ml
— 说明书 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
操作步骤：
（一）贴壁培养细胞
1、取RIPA(强)裂解液置室温融解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗1次，低速离
心，弃上清，留取沉淀。
3、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的RIPA(强)裂解液，移液器轻轻吹
打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～
3s内，细胞就会被裂解。
4、10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），
取上清。
5、后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（二）悬浮培养细胞
1、取RIPA(强)裂解液置室温融解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF
的RIPA(强)裂解液，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～
250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），
取上清。
5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（三）组织样本
1、取RIPA(强)裂解液置室温融解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速研磨，研磨过程尽量
控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的裂解液，
冰上或4℃裂解15～30min。
5、步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的
比例加入含有PMSF的RIPA(强)裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充
分裂解，该过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃离心5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），
取上清。
7、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。建议将其适当分装成合
适的量，然后置于-20℃中保存。
2. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3. 建议在临用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF可以向我公
司订购。
3. 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋
白没有干扰，可以不用清洗。
4. 如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，
可以适当减少裂解液的用量。
5. 如果细胞量较多，必须分装成50~100万细胞/离心管然后再裂解。大团的细胞
较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对容易裂解充
分。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液中裂解，通过
强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的
优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆器或研磨那样裂
解得比较充分。
7. 如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶消
化，然后再使用本裂解液进行裂解。
8. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透
明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋
白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特
别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用
于后续实验。
9. 复融后的试剂请及时使用，避免裂解液中有效成分失效。
10. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于
食品或药品，不得存放于普通住宅内。
11. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

回复人：jinanpengd,▲ (聚乙烯吡咯烷酮生产) 时间：2023-04-14 15:42:13 编辑	1楼
聚乙烯吡咯烷酮 (PVPK-30) (PVPK-90) 异丙醇无水乙醇乙二醇丁醚三乙醇胺硼酸酯甲基异丙基酮(MIPK) 甲基叔丁基醚(MTBE) 150#溶剂油正戊烷聚乙二醇400 巴斯夫三元聚羧酸L190 三元酸 13884981113

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