问题：急需帮助！柱层析的问题！
类型：求助 (悬赏分:3分)
提问：botanic
等级：▲
版块：基本操作、分离技术(qixie,wanghong,)
信誉：10%
回复：25
阅读：3033
时间：2005-07-23 21:32:17 编辑加入/取消收藏订制/取消短消息举报该贴

我将用硅胶吸附层析柱，分离10g的样品，应该选用什么规格的层析柱！
硅胶用量应该为多少？单位是体积还是质量（一直不明白，上样硅胶是上样量的30-40倍，是体积还是质量）？合适的柱长是多少，能用非常长的柱子吗？比如2米以上。

谢谢！

回复人：yangzh8510,▲ (勤奋、好学、塌实、稳重) 时间：2006-09-19 15:27:38 编辑

1楼

根据以下方面考虑:
溶剂方面：是制备结晶的关键所在。除yangdongyu提到的外，选择时可用少量各种不同溶剂试验其溶解度，包裹冷时和热时。一般首选乙醇。另外，尽可能选择单一溶剂，这样在大生产时也可较好的解决母液回收套用问题，降低成本。研究时，混合溶剂一般会有更好效果。还有安全，价廉也是考虑因素。

结晶条件：主要指温度，压力，是否搅拌等。温度很重要，一般我们都是低温冷藏，其实有时还需要高温保温！这主要需摸清其溶解度的关系在确定结晶温度。搅拌也是一个影响因素，他对结晶的晶型，结晶的快慢都有影响。

结晶纯度判定：都是一般的常规方法。不过都某些产品作的多了，可以凭经验的，如该样品经过多次重结晶后，看到应该出现的那种晶型，根据以往检测结果，其含量应该***不离十了，不信HPLC测去
另外选择梯度降温的条件对晶型和收率影响也较大
还有就是加晶种的时机：晶种加得过早，晶种溶解或产生的晶型一般较细；加的晚，则溶液里可能已经产生了晶核，造成结晶可能包裹杂质
重结晶方法是利用固体混合物中各组分在某种溶剂中的溶解度不同而使其相互分离。
进行重结晶的简单程序是先将不纯固体物质溶解于适当的热的溶剂中制成接近饱和的溶液，趁热过滤除去不溶性杂质，冷却滤液，使晶体自过饱和溶液中析出，而易溶性杂质仍
留于母液小，抽气过滤，将晶体从母液中分出，干燥后测定熔点，如纯度仍不符合要求，可再次进行重结晶，直至符合要求为止。
关于溶剂的选择
选择适当的溶剂对于重结晶操作的成功具有重大的意义，一个良好的溶剂必须符合下面儿个条件：
1、不与被提纯物质起化学反应
2、在较高温度时能溶解多量的被提纯物质而在室温或更低温度时只能溶解很少量；
3．对杂质的溶解度非常大或非常小，前一种情况杂质留于母液内，后一种情况趁热过滤时杂质被滤除；
4．溶剂的沸点不宜太低，也不宜过高。溶剂沸点过低时制成溶液和冷却结晶两步操作温差小，团体物溶解度改变不大，影响收率，而且低沸点溶剂操作也不方便。溶剂沸点过高，附着于晶体表面的溶剂不易除去。
5．能给出较好的结晶。
在几种溶剂都适用时，则应根据结晶的回收率、操作的难易、溶剂的毒性大小及是否易燃、价格高低等择优选用。
关于晶体的析出
过滤得到的滤液冷却后，晶体就会析出。用冷水或冰水迅速冷却并剧烈搅动溶液时，可得到颗粒很小的晶体，将热溶液在空温条件下静置使之缓缓冷却，则可得到均匀而较大的品体。
如果溶液冷却后晶体仍不析出，可用玻璃抹摩控液面下的容器壁，也可加入品种，或进一步降低溶液温度(用冰水或其它冷冻溶液冷却)。
如果溶液冷却后不析出品体而得到油状物时，可重新加热，至形成澄清的热溶液后，任其自行冷却，并不断用玻璃棒搅拌溶液，摩擦器壁或投人品种，以加速品体的析出。若仍有油状物开始忻出，应立即剧烈搅拌使油滴分散。

回复人：wst1013,▲ () 时间：2006-09-19 16:18:46 编辑

2楼

你要分离的是10g的样品,看了下面这个表,你该知道怎么做了吧?
样品量与柱内径的关系
样品量(g)　　　吸附剂量(g)　　　　柱直径(cm)　　　　柱高(cm)
0.001　　　　　　0.3　　　　　　　　1.5　　　　　　　　20
0.1　　　　　　　3　　　　　　　　　5　　　　　　　　　40
1.0　　　　　　　30　　　　　　　　 7.5　　　　　　　　100
10.0　　　　　　 300　　　　　　　　10　　　　　　　　 200

上面这个表有问题啊！

10g样品用300g硅胶吸附没错，可用这么长这么粗的柱子就不象话了，10X200的柱子体积起码有15L，300g硅胶能装多高啊？

一般，对粗提物进行分离，1：30的比例还是要的，柱子嘛，5X40或者4X50够了！

回复人：ckneng2006,▲ (集体的力量是最强大的。) 时间：2006-10-18 23:42:45 编辑	3楼
是的没有必要用那么大的柱子，真是浪费

回复人：温暖的心,▲▲▲▲ () 时间：2006-10-19 07:59:10 编辑	4楼
硅胶100-200目的，如果点分得比较开，比较好分离，就用稍微短一些，粗点的柱子。 30~40倍是指质量比

回复人：ltwcj,▲▲ (快乐生活！！！) 时间：2005-07-24 21:06:15 编辑	5楼
可以选用五，六厘米直径，长30-40厘米的抽柱，或常压柱。拌样：选20-30克100-200目的硅胶，上柱的硅胶的量可以根据产品分离难易程都来定。当然，你也可以湿法装柱（待分产品为油状）。

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-07-25 11:06:20 编辑	6楼
收到，谢谢！

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-25 18:37:59 编辑

7楼

层析柱的形状,一般认为直径与高度的比为1:15为宜,也有人认为1:100或1:200都可以.柱行必须根据层析介质和分离目的而定.待分离物质的性质相近,柱越细长,则分离的效果越好,但流速较慢.为了防止细目交换剂因外压而排列紧密,从而造成阻塞现象,在样品组分并不复杂的情况下,采用“矮胖柱”也是可以的.在离子交换层析中,通常应根据样品的量和杂质情况,通过交换剂全交换量指标,先粗略计算应用多少交换剂后,在根据样品中组分情况和层析条件决定所用柱的直径和高度.

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-26 11:51:53 编辑	8楼
你要分离的是10g的样品,看了下面这个表,你该知道怎么做了吧? 样品量与柱内径的关系样品量(g) 吸附剂量(g) 柱直径(cm) 柱高(cm) 0.001 0.3 1.5 20 0.1 3 5 40 1.0 30 7.5 100 10.0 300 10 200

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-07-26 19:53:46 编辑	9楼
谢谢！我选用的是硅胶吸附层析，硅胶为100-200，对样品进行初步分离！然后在细分。非常感谢！2米的柱子对层析过程何效果有无其他不好的影响？

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-27 11:48:30 编辑

10楼

层析柱的长短、粗细对层析效果都会产生直接的影响。在实际工作中，常常通过系统实验来选择规格适合的层析柱。为了满足高分辨率的要求，通常采用L/D（长度/直径）比值高的柱子。但增高柱长虽然能提高分辨率，但会影响流速和增加样品的稀释度。L/D比值的选择与凝胶的性质也有关系。交联度小的凝胶柱不宜细而长，不然从装柱开始，在操作上有一系列困难。

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-07-27 22:00:52 编辑	11楼
我是用硅胶做吸附层析！我选用的是硅胶吸附层析，硅胶为100-200，对样品进行初步分离！然后在细分。非常感谢！2米的柱子对层析过程何效果有无其他不好的影响？

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-28 09:29:49 编辑	12楼
你是什么意思?你所谓的吸附层析是指什么层析?是吸附柱色谱,还是薄层层析色谱?但按照你的说法,你做的应该是薄层层析,但后面又提到了柱子,我真的不明白你究竟所指的是什么东西?你能不能说得详细点?!

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-07-28 10:02:40 编辑	13楼
我是用硅胶，100-200目，做柱层析初步分离。过柱子。材料是用硅胶，现在先不用凝胶和聚酰胺。谢谢！

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-28 19:35:36 编辑	14楼
好,是我理解错误，现在总算知道你要干嘛了。

回复人：lingxiang,▲ () 时间：2005-07-28 19:38:22 编辑	15楼
层析柱的形状,一般认为直径与高度的比为1:15为宜,也有人认为1:100或1:200都可以.柱行必须根据层析介质和分离目的而定.待分离物质的性质相近,柱越细长,则分离的效果越好,但流速较慢.所以，你应该知道2米以上的柱子对层析过程和效果有什么影响了吧。

回复人：susanz,▲ (有机合成中……) 时间：2005-08-20 17:34:03 编辑

16楼

产品是固体吗？10克的量怎么不尝试一下重结晶呢。我们实验室一般新反应或者小剂量才做柱子，重复的实验或者放大量以后一般都会找条件重结晶了，有时即使板子上有2，3个杂质点都能把产品提纯出来。仅供参考哦，呵呵。做柱子还是比较稳妥的方法啦，楼上的前辈也讲了很多宝贵经验，此外，强烈推荐一本好书《Purification of Laboratory Chemicals 》。

回复人：方无忧,★★ (有机化学是我的职业。金属有机化学是我的方向。成为一个科学家是我的理想。) 时间：2005-08-20 18:09:39 编辑	17楼
样品量和硅胶量1：30是过于保守了实际上根据具体情形不同而有异一般来说 10g样品，用200g硅胶，8×120的柱子足够了

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-08-22 20:06:07 编辑	18楼
12楼的高手，我的样品是直接提取的粗提物，很不纯，如何进行结晶呀？

回复人：botanic,▲ (植物成分提取分离鉴定) 时间：2005-08-22 20:09:02 编辑	19楼
《Purification of Laboratory Chemicals 》这本书有没有电子版的，或者中文的。

回复人：haruko2007,▲ (学习如同逆水行舟，不进则退) 时间：2007-10-30 19:23:59 编辑	20楼
2米长的柱子分离效果会好些，但太浪费时间了你的样品有10克，柱子不能太细了建议用5X40的柱子，硅胶260mL就足够了

回复人：ryl298,▲ (努力并顺其自然) 时间：2007-11-02 21:53:09 编辑	21楼
对提取物粗分，10g样品，1：20-1：30的比例就可以了，是质量比哦。柱子，用5cmX60cm或者4cmX50cm就可以了

回复人：ryl298,▲ (努力并顺其自然) 时间：2007-11-02 21:55:19 编辑	22楼
五楼同胞，你这数据表不是害人吗？哪整的表？ "你要分离的是10g的样品,看了下面这个表,你该知道怎么做了吧? 样品量与柱内径的关系样品量(g) 吸附剂量(g) 柱直径(cm) 柱高(cm) 0.001 0.3 1.5 20 0.1 3 5 40 1.0 30 7.5 100 10.0 300 10 200"

回复人：liuyanlin2,▲ () 时间：2007-12-12 13:41:35 编辑	23楼
谢谢！觉得你们讲得太精彩了。

问题讨论没有结束...

您尚未进入本论坛,登录之后才可以回贴

8msec